BJPX-H54 病毒灭活设备

近年来，随着单抗市场在国内的兴起，对病毒清除技术（灭活和去除）的验证也提出了高的要求，从初的低pH孵育到近几年除病毒膜过滤技术在病毒清除方面的成熟的应用，包括层析技术也逐渐被大家重视，从而进一步提高下游工艺对于病毒的总的对数清除率。
在验证实验中，不管是哪种病毒清除技术，都是通过人为挑战病毒，然后采用感染力或者其他适合的分析方法来估测样品中的病毒滴度，然后测量出该步骤的病毒对数清除率，因此选择一种合适的病毒灭活检测分析方法对于病毒对数清除率的计算非常重要。
在病毒清除验证中，病毒的检测分为三种情况：
1、根据病毒的感染性来定量病毒的滴度，有两种方法，一称为病毒空斑形成实验。二称作TCID50半数细胞培养物感染量实验，这种检测方法是以细胞培养物中产生细胞病变效应（Cyto-pathic Effect，CPE）为基础的检测手段。
2、定量PCR的方法，尽管空斑形成和TCID50这两种以细胞为基础的感染性分析被视为病毒清除研究中的估测病毒滴度的金标准，qPCR方法已经被迅速接受为病毒清除研究中估测病毒粒子的替代和补充方法。
3、直接用电子显微镜来计数病毒数目，但是由于该方法不能区分感染毒颗粒与非感染毒颗粒，因此无法判断病毒的感染力，主要用于细胞发酵液的病毒初始量的计算中，因此着重介绍空斑形成实验，TCID50实验和qPCR三种检测方法。
一、病毒培育与灭活实验
1. 实验材料
实验用病毒株，宿主细胞，细胞培养瓶与 96 孔培养板，恒温水 浴箱，二氧化碳培养箱，层流**净工作台，-80℃低温箱，二氧化碳培养箱，液氮，离心设备，移液器，细胞维持培养基，细胞培养基，去离子水等。
2.实验过程
病毒悬液制备：实验组，阳性对照组，阴性对照组。病毒培育需每日观察细胞与宿主细胞生长情况，接种细胞，病变收获病毒， 每组按照特定条件设置病毒灭杀实验验证，并每组进行噬斑病毒感染滴度测定。平均灭活对数值计算，评价。

消毒：消毒是指杀死病原微生物、但不一定能杀死芽孢的方法。通常用化学的方法来达到消毒的作用。用于消毒的化学药物叫做消毒剂。

通过上面的两个概念你可以知道无论是还是病毒在灭菌操作下都会被杀死，灭菌操作下除部分的芽孢基本微生物都可以杀灭，不过也根据消毒液使用的不同或者微生物的耐受不同而效果不同。

病毒灭活试验器材：
1、试验用病毒株:脊髓灰质炎病毒1型(poliovirus- I，PV- I )；疫苗株;艾滋病病毒1型(HIV-1)美国株。
2、宿主细胞:可采用VERO细胞系、BGM细胞、Hela细胞系或FL、细胞系，作为PV-1的测试细胞。用含有人T淋巴细胞白血病病毒1型(human T cell leukemiavirus 1, HTLV-1)基因的人淋巴细胞(株)作为HIV-1的测试细胞。
3、细胞培养瓶与96孔培养板。
4、恒温水浴箱。
5、二氧化碳培养箱。
6、层流**净工作台。
7、低温冰箱(-20°C， -80°C)。
8、液氮罐。
9、倒置显微镜。
10、离心机。
11、可调移液器及配套一 次性塑料吸头。
12、细胞维持培养基。
13、细胞培养基。
14、去离子水。
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